公布日：2023.10.27
申請日：2023.07.19
分類號(hào)：C12N1/20(2006.01)I;C02F3/34(2023.01)I;C02F3/02(2023.01)I;C12R1/38(2006.01)N;C12R1/01(2006.01)N;C12R1/22(2006.01)N;C02F101/36(2006.01)N;
C02F101/34(2006.01)N;C02F101/30(2006.01)N
摘要
本發(fā)明提供一種用于處理含對氯間二甲苯酚生產(chǎn)廢水的復(fù)合微生物菌劑及其制備方法和應(yīng)用，復(fù)合微生物菌劑由復(fù)合微生物菌劑由嗜堿假單胞菌(Pseudomonasalcaliphila)，耳炎假單胞菌(Pseudomonasotitidis)，硝基還原假單胞菌(Pseudomonasnitroreducens)，賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillusmangiferihumi)，球形賴氨酸桿菌(Lysinibacillussphaericus)，克雷伯氏菌屬(Klebsiellasp.)，檸檬酸桿菌(Citrobacterwerkmanii)，弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)組成。通過采用本發(fā)明的技術(shù)方案，各組分種群相互協(xié)同，強(qiáng)化對生產(chǎn)廢水的降解效能，且對于對氯間二甲苯酚的含量也能夠通過生物作用的方法進(jìn)行去除，降解方法針對性強(qiáng)、響應(yīng)時(shí)間快、操作簡單，可以應(yīng)用于含有對氯間二甲苯酚的生產(chǎn)廢水中，同時(shí)還能夠有效降低廢水的COD。
權(quán)利要求書
1.一種用于處理含對氯間二甲苯酚生產(chǎn)廢水的復(fù)合微生物菌劑，復(fù)合微生物菌劑由復(fù)合微生物菌劑由嗜堿假單胞菌(Pseudomonasalcaliphila)，耳炎假單胞菌(Pseudomonasotitidis)，硝基還原假單胞菌(Pseudomonasnitroreducens)，賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillusmangiferihumi)，球形賴氨酸桿菌(Lysinibacillussphaericus)，克雷伯氏菌屬(Klebsiellasp.)，檸檬酸桿菌(Citrobacterwerkmanii)，弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于處理含對氯間二甲苯酚生產(chǎn)廢水的復(fù)合微生物菌劑，其特征在于，所述復(fù)合微生物菌劑中，各菌株的菌細(xì)胞濃度百分比為嗜堿假單胞菌(Pseudomonasalcaliphila)25％-35％、耳炎假單胞菌(Pseudomonasotitidis)20％-35％、硝基還原假單胞菌(Pseudomonasnitroreducens)20％-35％、賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillusmangiferihumi)5％-15％、球形賴氨酸桿菌(Lysinibacillussphaericus)5％-10％、克雷伯氏菌屬(Klebsiellasp.)5％-10％、檸檬酸桿菌(Citrobacterwerkmanii)5％-10％和弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)5％-10％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用于處理含對氯間二甲苯酚生產(chǎn)廢水的復(fù)合微生物菌劑，其特征在于，所述復(fù)合微生物菌劑為液體菌劑；所述液體菌劑中菌細(xì)胞濃度為≥109個(gè)/mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于處理含對氯間二甲苯酚生產(chǎn)廢水的復(fù)合微生物菌劑，其特征在于，所述復(fù)合微生物菌劑對含對氯間二甲苯酚生產(chǎn)廢水的COD降解率≥85％，對對氯間二甲苯酚的分解率可達(dá)70％。
5.一種如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的用于處理含對氯間二甲苯酚生產(chǎn)廢水的復(fù)合微生物菌劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：S1、將嗜堿假單胞菌(Pseudomonasalcaliphila)、耳炎假單胞菌(Pseudomonasotitidis)、硝基還原假單胞菌(Pseudomonasnitroreducens)、賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillusmangiferihumi)、球形賴氨酸桿菌(Lysinibacillussphaericus)、克雷伯氏菌屬(Klebsiellasp.)、檸檬酸桿菌(Citrobacterwerkmanii)和弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)活化；S2、將活化后的8種菌株分別接種到培養(yǎng)基中，直至每種培養(yǎng)基中菌細(xì)胞濃度≥109個(gè)/mL；S3、按嗜堿假單胞菌(Pseudomonasalcaliphila)25％-35％、耳炎假單胞菌(Pseudomonasotitidis)20％-35％、硝基還原假單胞菌(Pseudomonasnitroreducens)20％-35％、賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillusmangiferihumi)5％-15％、球形賴氨酸桿菌(Lysinibacillussphaericus)5％-10％、克雷伯氏菌屬(Klebsiellasp.)5％-10％、檸檬酸桿菌(Citrobacterwerkmanii)5％-10％和弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)5％-10％的菌細(xì)胞濃度百分比將8種菌液混合，得到所述復(fù)合微生物菌劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于處理含對氯間二甲苯酚生產(chǎn)廢水的復(fù)合微生物菌劑的制備方法，其特征在于，所述培養(yǎng)基包括營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基和LB液體培養(yǎng)基；將活化后的菌株分別接種至所述營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基中長出比較均一、規(guī)則的菌落后，再接種至所述LB培養(yǎng)基中，直至每種培養(yǎng)基中菌細(xì)胞濃度≥109個(gè)/mL。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于處理含對氯間二甲苯酚生產(chǎn)廢水的復(fù)合微生物菌劑的制備方法，其特征在于，所述營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基中培養(yǎng)條件包括25℃-30℃溫度下培養(yǎng)24h-48h；所述LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)條件包括好氧培養(yǎng)、30℃溫度條件下培養(yǎng)24h-48h。
8.一種如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的用于處理含對氯間二甲苯酚生產(chǎn)廢水的復(fù)合微生物菌劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：S1、將嗜堿假單胞菌(Pseudomonasalcaliphila)，耳炎假單胞菌(Pseudomonasotitidis)，硝基還原假單胞菌(Pseudomonasnitroreducens)，賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillusmangiferihumi)，球形賴氨酸桿菌(Lysinibacillussphaericus)，克雷伯氏菌屬(Klebsiellasp.)，檸檬酸桿菌(Citrobacterwerkmanii)，弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)活化；S2、將10種活化后的菌株分別接種到培養(yǎng)基中，直至每種培養(yǎng)基中菌細(xì)胞濃度≥109個(gè)/mL；S3、將S2培養(yǎng)后的菌種分別按10％的接種量接種入500L種子罐，好氧培養(yǎng)至對數(shù)生長期，所述種子罐中的培養(yǎng)基為LB液體培養(yǎng)基；S3、將種子液按10％接種量接入生產(chǎn)罐中培養(yǎng)，所述生產(chǎn)罐中的培養(yǎng)基與所述種子罐中的培養(yǎng)基相同；S4、在所述生產(chǎn)罐結(jié)束后菌體數(shù)量≥10億個(gè)/mL，完成后分別出罐，依照菌細(xì)胞百分比濃度比例將10種菌混合，即為所述復(fù)合微生物菌劑的液體菌劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用于處理含對氯間二甲苯酚生產(chǎn)廢水的復(fù)合微生物菌劑的制備方法，其特征在于，所述生產(chǎn)罐中的培養(yǎng)條件包括攪拌速度為180～240r/min，培養(yǎng)溫度為30℃，整個(gè)工藝流程培養(yǎng)時(shí)間為48～60h。
10.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的用于處理含對氯間二甲苯酚生產(chǎn)廢水的復(fù)合微生物菌劑或如權(quán)利要求5-8任一項(xiàng)所述的制備方法得到的所述復(fù)合微生物菌劑在處理含對氯間二甲苯酚生產(chǎn)廢水的應(yīng)用，接種量為1～5g/L。
發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明提供一種用于處理含對氯間二甲苯酚(PCMX)生產(chǎn)廢水的復(fù)合微生物菌劑及其制備方法和應(yīng)用，通過各組分種群的相互協(xié)同作用，強(qiáng)化對降解底物的降解效能、響應(yīng)時(shí)間快、操作簡單。
為了達(dá)到上述目的，本申請?zhí)峁┤缦录夹g(shù)方案：
一種用于處理含對氯間二甲苯酚生產(chǎn)廢水的復(fù)合微生物菌劑，復(fù)合微生物菌劑由復(fù)合微生物菌劑由嗜堿假單胞菌(Pseudomonasalcaliphila)，耳炎假單胞菌(Pseudomonasotitidis)，硝基還原假單胞菌(Pseudomonasnitroreducens)，賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillusmangiferihumi)，球形賴氨酸桿菌(Lysinibacillussphaericus)，克雷伯氏菌屬(Klebsiellasp.)，檸檬酸桿菌(Citrobacterwerkmanii)，弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)組成。
優(yōu)選地，所述復(fù)合微生物菌劑中，各菌株的菌細(xì)胞濃度百分比為嗜堿假單胞菌(Pseudomonasalcaliphila)25％-35％、耳炎假單胞菌(Pseudomonasotitidis)20％-35％、硝基還原假單胞菌(Pseudomonasnitroreducens)20％-35％、賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillusmangiferihumi)5％-15％、球形賴氨酸桿菌(Lysinibacillussphaericus)5％-10％、克雷伯氏菌屬(Klebsiellasp.)5％-10％、檸檬酸桿菌(Citrobacterwerkmanii)5％-10％和弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)5％-10％。
優(yōu)選地，所述復(fù)合微生物菌劑為液體菌劑。
優(yōu)選地，所述液體菌劑中菌細(xì)胞濃度為≥109個(gè)/mL。
本發(fā)明還提供了上述復(fù)合微生物菌劑的制備方法，包括以下步驟：
S1、將嗜堿假單胞菌(Pseudomonasalcaliphila)、耳炎假單胞菌(Pseudomonasotitidis)、硝基還原假單胞菌(Pseudomonasnitroreducens)、賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillusmangiferihumi)、球形賴氨酸桿菌(Lysinibacillussphaericus)、克雷伯氏菌屬(Klebsiellasp.)、檸檬酸桿菌(Citrobacterwerkmanii)和弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)活化；
S2、將活化后的8種菌株分別接種到培養(yǎng)基中，直至每種培養(yǎng)基中菌細(xì)胞濃度≥109個(gè)/mL；
S3、按嗜堿假單胞菌(Pseudomonasalcaliphila)25％-35％、耳炎假單胞菌(Pseudomonasotitidis)20％-35％、硝基還原假單胞菌(Pseudomonasnitroreducens)20％-35％、賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillusmangiferihumi)5％-15％、球形賴氨酸桿菌(Lysinibacillussphaericus)5％-10％、克雷伯氏菌屬(Klebsiellasp.)5％-10％、檸檬酸桿菌(Citrobacterwerkmanii)5％-10％和弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)5％-10％的菌細(xì)胞濃度百分比將8種菌液混合，得到所述復(fù)合微生物菌劑。
優(yōu)選地，所述培養(yǎng)基包括營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基和LB液體培養(yǎng)基；將活化后的菌株分別接種至所述營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基中長出比較均一、規(guī)則的菌落后，再接種至所述LB培養(yǎng)基中，直至每種培養(yǎng)基中菌細(xì)胞濃度≥109個(gè)/mL。
優(yōu)選地，所述營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基中培養(yǎng)條件包括25℃-30℃溫度下培養(yǎng)24h-48h；所述LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)條件包括好氧培養(yǎng)、30℃溫度條件下培養(yǎng)24h-48h。
進(jìn)一步地，上述制備方法的具體步驟還包括：
S1、將嗜堿假單胞菌(Pseudomonasalcaliphila)25％-35％、耳炎假單胞菌(Pseudomonasotitidis)20％-35％、硝基還原假單胞菌(Pseudomonasnitroreducens)20％-35％、賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillusmangiferihumi)5％-15％、球形賴氨酸桿菌(Lysinibacillussphaericus)5％-10％、克雷伯氏菌屬(Klebsiellasp.)5％-10％、檸檬酸桿菌(Citrobacterwerkmanii)5％-10％、弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)5％-10％活化；
S2、將10種活化后的菌株分別接種到培養(yǎng)基中，直至每種培養(yǎng)基中菌細(xì)胞濃度≥109個(gè)/mL；
S3、將S2培養(yǎng)后的菌種分別按10％的接種量接種入500L種子罐，好氧培養(yǎng)至對數(shù)生長期，所述種子罐中的培養(yǎng)基為LB液體培養(yǎng)基；
S3、將種子液按10％接種量接入生產(chǎn)罐中培養(yǎng)，所述生產(chǎn)罐中的培養(yǎng)基與所述種子罐中的培養(yǎng)基相同；
S4、在所述生產(chǎn)罐培養(yǎng)結(jié)束后菌體數(shù)量≥10億個(gè)/mL，完成后分別出罐，依照菌細(xì)胞百分比濃度比例將10種菌混合，即為所述復(fù)合微生物菌劑的液體菌劑。
優(yōu)選地，所述生產(chǎn)罐中的培養(yǎng)條件包括攪拌速度為180～240r/min，培養(yǎng)溫度為30℃，整個(gè)工藝流程培養(yǎng)時(shí)間為48～60h。
將上述復(fù)合菌劑應(yīng)用于含對氯間二甲苯酚生產(chǎn)廢水的處理中，能夠?qū)⑴懦膹U水中的對氯間二甲苯酚的含量降低至30％以下，且對所述復(fù)合微生物菌劑對含對氯間二甲苯酚生產(chǎn)廢水的COD降解率≥85％。
尤其地，對于含有對氯間二甲苯酚的生產(chǎn)廢水應(yīng)當(dāng)都具有上述效果。
本發(fā)明所獲得的有益技術(shù)效果：
1.通過采用本發(fā)明的技術(shù)方案，各組分種群相互協(xié)同，強(qiáng)化對降解底物的降解效能，并通過微生物降解的方法，處理對氯間二甲苯酚有機(jī)的含量，針對性強(qiáng)，降解方法針對性強(qiáng)、響應(yīng)時(shí)間快、操作簡單，可以應(yīng)用于COD的降解，也可以應(yīng)用于含對氯間二甲苯酚廢水好氧處理。
2.通過采用本發(fā)明的技術(shù)方案，將復(fù)合微生物菌劑應(yīng)用于實(shí)現(xiàn)的生產(chǎn)廢水好氧處理中，借助復(fù)合菌劑的優(yōu)勢，能夠大大降低生產(chǎn)廢水中COD與對氯間二甲苯酚的含量等作用，處理效果穩(wěn)定，能夠?qū)崿F(xiàn)達(dá)標(biāo)排放。
（發(fā)明人：張紅日;鐘隆鳴;劉秀艷）
