BOD5測定通常采用標(biāo)準(zhǔn)稀釋與接種法（GB 7488--87），其操作為，經(jīng)中和及除去毒性物質(zhì)并經(jīng)稀釋后的水樣（必要時加入適量含好氧微生物的接種液）置入培養(yǎng)瓶中，于在20oC暗處培養(yǎng)5d，通過分別測定培養(yǎng)前后水樣中溶解氧的含量，來計算出5d內(nèi)的耗氧量，再根據(jù)稀釋倍數(shù)求得其BOD5。

BOD5的測定是生物作用和化學(xué)作用的共同結(jié)果，必須嚴(yán)格按照操作規(guī)范進(jìn)行，變更任何一個條件，都將影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性。影響B(tài)OD5測定的條件包括pH值、溫度、微生物種類和數(shù)量、無機(jī)鹽含量、溶解氧和稀釋倍數(shù)等。